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    琼脂培养基制备使用介绍及注意要点

    日期:2022-06-07 | 中海生物技术文库 | 浏览:224 次

    琼脂(Agar)是一类从植物中提取的多糖,主要是源自于海藻植物。在微生物培养基中,琼脂通常只用作凝固剂。液体培养基中琼脂的用量通常为0.5~2g/L,使培养基拥有相应的粘性,避免液体对流。它经常使用于厌氧培养。半固体培养基琼脂用量通常为3.5~4g/L,经常使用于菌种保藏、动态试验等。植物组织培养基中琼脂的用量通常为5~10g/L,固体培养基中琼脂的用量通常为5~10g/L。通常琼脂粉为白色、浅黄色或浅灰色粉末,不溶解于冷水。大多数琼脂的熔点在90℃左右,冷却后大多数琼脂的冰点在40℃左右。反复加热冷却可以使琼脂多次由液态变为固态,但琼脂的凝胶强度会愈来愈低。

    一、琼脂培养基制备使用

    ①依据琼脂培养基的产品标签,称取适量培养基干粉,溶解于纯净水中,加热煮沸至琼脂完全溶解,分装于试管或锥形瓶中;

    ②在规定的条件下对包装好的培养基进行灭菌。加热灭菌后的培养基可反复煮沸4~6次,一直到中海培养基完全溶解,然后倒入平板中待用;

    ③灭菌后,待培养基冷却至50℃左右时,可放至47~50℃的水浴中保温。水浴温度可依据中海生物琼脂培养基实际凝固温度适当提高,存放时间通常不超过四个钟头;

    ④使用前,加入相应的添加剂成分,摇匀,倒入平板中,凝固后备用;或制成斜面,投入使用等。

    二、琼脂培养基注意要点

    ①溶解干粉时,提议水温在40℃以下,不超过60℃。琼脂遇到热水,表面容易吸水变硬,不利于分散和溶解。所以干粉溶解时,宜用冷水并不断搅拌,一直到分散均匀无结块,后再加热。

    ②灭菌前,须要将琼脂加热煮沸,使其完全溶解分散均匀后,方能进行试管或锥形瓶分装,不然分装后琼脂可能分布不均、凝结;

    ③灭菌前加热煮沸溶解还有助于加快高压灭菌过程中的热量渗透,提高灭菌效果,降低灭菌失败的概率。

    ④凝固的培养基不能重新高温高压灭菌。倘若中 海培养基中的成分稳定,可以在沸水浴中重新溶解以供一次使用。

    ⑤须要添加抗生素或其他不稳定成分的培养基应在使用前添加,当培养基冷却至50~55℃时添加。过早或过烫加入这些成分,容易导致不稳定成分分解,降低培养基的使用效果;

    ⑥固化后的培养基不能反复加热融化使用。反复加热容易分解培养基中的营养物质,琼脂的凝胶强度下降。通常允许成分稳定的培养基溶解一次使用。

    ⑦固化的培养基不宜储存在冷冻条件下。中海培养基冷冻会破坏琼脂的内部结构,造成琼脂变性,水分流失或凝结不良。


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