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    布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书

    日期:2022-10-08 | 中海生物技术文库 | 浏览:132 次

     

    【作用与用途】

    布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒(Brucellosis Antibody Test Kit)用于检测牛、羊血清中的布鲁氏菌特异性抗体,用于血清学诊断。 

    【检测原理】

    布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒采用竞争ELISA方法,在酶标板微孔上预包被布鲁氏菌抗原。在实验中,加入稀释后的待检血清、酶标二抗工作液、单克隆抗体工作液经过温育后,若样品中含有布鲁氏菌抗体,则与单克隆抗体竞争板孔中包被的抗原表位,酶标二抗与单克隆抗体结合,形成布鲁氏菌抗原-单克隆抗体-酶标二抗复合物,温育后将多余的游离抗体通过洗涤去除,在微孔中加入TMB显色液,经酶催化产生的蓝色信号与样品中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。

    【主要成分与含量】

    布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒主要成分与含量

    【需自备的材料】 

    微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm)、去离子水、离心机(4000 rpm)、恒温培养箱(37 ℃)、计时器等。

    【用法与判定】

    1、用法

    1.1 试剂配制

    洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25 ℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37 ℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作10倍稀释(例如:75 mL的浓缩洗涤液加上675 mL蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。

    1.2 样本处理

    取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm离心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。

    1.3 待检血清和对照血清的稀释

    在血清稀释板中按1:40稀释待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清(如195 µL样品稀释液中加5 µL血清样品),充分混匀。

    1.4 操作步骤

    ① 取包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清、阳性对照血清和阴性对照血清分别加入到板孔中,50 μL/孔,其中阳性对照血清和阴性对照血清各加 2 孔。加样结束后,再依次加入酶标二抗工作液50 μL/孔,抗体工作液100 μL/孔。轻轻振匀孔中液体,盖上盖板膜,37 ℃温箱中避光反应30 min。

    ② 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300 µL,静置1 min后,弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干。

    ③ 将底物A液与底物B液按1:1混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,37 ℃温箱中避光反应15 min。

    ④ 每孔加入终止液50 µL,5 min内测定结果。

    2、判定

    在酶标仪上读各孔OD450nm值。

    ①试验成立的条件:

    阳性对照孔OD均值应<0.2,阴性对照孔OD均值应>1.0,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

    ② 计算方法:

    PI(阻断率)=100 % -(样品OD值÷阴性OD均值)×100%

    ③ 阴阳性判断:

    PI≥30 %判为阳性,PI<30%判为阴性。

    【注意事项】

    1、布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回2~8 ℃保存。

    2、不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

    3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

    4、待检血清数量较多时,应先稀释完所有待检血清,再加到抗原包被板上,使反应时间一致。

    5、稀释10×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。

    6、移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

    7、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

    【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为12个月。

    【规格】96孔/盒;192孔/盒

    【生产企业】  北京中海生物科技有限公司

                  中海生物技术(枣庄)有限公司  

                  网址:www.zhzbio.com  

    仅供兽医诊断使用


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-blsjjzelisa.html


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