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    ELISA酶联免疫吸附测定步骤和注意事项要点

    日期:2022-02-15 | 中海生物技术文库 | 浏览:980 次

    通常情况下,各种类型的ELISA酶联免疫吸附测定方法需用(固相包被→添加待测样品→温育→清洗→添加酶标物→温育→清洗→添加底物→温育→加终止液→比色→判定结论)这些操作顺序步骤。中海生物酶联免疫吸附试验操作流程较为复杂,操作流程不恰当会产生很大的偏差。操作流程中应特别注意这些五个注意事项要点。

    要点伴随着疾病进展或受别的方面影响,体内某种抗体的含量变化很大,需用对样品做好预备处理,如适度稀释血清样品或离心血脂。在间接法中,适度稀释样品也能够降低非特异性反应。

    要点液体进料器通常用以添加样品。在中海ELISA酶联免疫测定中,海加样有四次(加样品/加酶结合物/加底物/加终止液)。添加样品时,需要为每个样品使用一个移液管喷嘴,以防止交叉污染。添加酶结合物及底物和终止液时不用替换吸嘴。

    要点在成批人工检验检测时,还应特别注意操作流程时间误差的影响。中'海样品添加时长和混合时长的不同,促使抗原抗体反应和酶促反应的时长不一致,对竞争法和定量检测有很大影响。无意间的特别注意将会造成不正确的结论或不精准的量化分析。

    要点洗涤是影响酶联免疫吸附中海ELISA试验成功与失败的重要环节。最终目的是除去未融合的免疫反应物,停止抗原-抗体反应,并除去与反应无关的样品。反应过程中吸附在固体载体上的成分/游离酶标记和非特异性物质。洗板机可用以洗板或手工洗板。前面一种清洗品质高,各反应孔清洗结论匀称,批次间差异性小。手工洗版要特别注意操控每个孔的洗版效果,差异性不适合过大。

    要点为了更好地精准测定方法结论,中 海应使用酶联免疫吸附试验读数器和微孔板读数器。酶标仪可重复性能好。比色判读可以选择单波长和双波长。应按照其反应液的不同颜色选择不同的波长滤光片,反应孔的吸光度值应通过空白孔的零点校准来确定好。


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