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    五种酶联免疫ELISA试剂盒检测方法优缺点对比解释

    日期:2021-12-06 | 中海生物技术文库 | 浏览:165 次

    中海生物技术为大家解释五种ELISA试剂zhzbio.com盒酶联免疫试剂盒检测方法优缺点对比参照:

    序号 ELISA试剂盒检测方法 优点 缺点 解释
    (一) 直接法(direct Elisa) 操作程序短,所以不需要使用二抗,避免了交互反应。 实验中所有的一级抗体都要用酶标记,但并不是每种抗体都适合标记,成本相对较高。 抗原总量可通过直接将抗原固定在固体载体上并加入酶标一抗来测定。这种一级抗体的特异性非常重要。
    (二) 间接法(indirect Elisa) 二抗可以加强信号,不同的测定分析有很多选择。没有酶标记的一级抗体可以保持其免疫反应性。 互动反应产生概率高。 这类方法与直接法相似,但不同的是一级抗体没有用酶标记,用酶标记的二级抗体鉴定一级抗体来确定抗原的量。
    (三) 双抗体夹心法(sandwich Elisa) 灵敏度和特异性高,抗原不用提前纯化。 抗原务必有两个以上的抗体结合位点。 进行检测到的抗原包被在两种抗体之间,在其中一种抗体将抗原稳固在固体载体上,即捕获抗体。另一种是进行检测抗体,可以用酶标记后直接测定抗原量。或是没有标记。随后用酶标二抗测定抗原量。务必仔细选择这两种抗体,以防止相互间反应或竞争相同的抗原结合位点。
    (四) 竞争法(competitive Elisa) 适用于不纯样品,数据重现性好。 整体敏感性和特异性差。 样品中的无抗原抗原与纯化并稳固在固体载体上的抗原固定化抗原竞争相同的抗体。当样品中游离抗原较多时,可以结合较多的抗体,而固定化抗原只能够结合较少的抗体,相反也是。清洗步骤后,洗去游离抗原和抗体的复合物,只留下稳固抗原和抗体的复合物,与对照组仅稳固抗原的结果做好比较,依据色差可以计算出样品中的抗原含量。
    (五) 基于细胞法(cell-based Elisa) 不用裂解细胞,于是靶蛋白损失较少,可以测量完整细胞/贴壁细胞/非贴壁细胞。 抗原量无法确定。 是一种新的定性蛋白质检测技术,在其中细胞直接在微孔板中培养。进行检测时,不用提取蛋白质或裂解细胞,直接测量刺激或抑制后微孔板中蛋白质的变化。

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