ELISA实验过程中遇到的四大类问题和处理办法
日期：2021-09-24 | 中海生物技术文库 | 浏览：672 次
㈠ELISA试验检测存在比较弱的结论，中海生物认为大致存在七种影响因素及其处理办法：
问题⑴：温育的时长以及环境温度不足；
处理办法：校准温育箱环境温度。
问题⑵：显色反应时长实在太短暂；
处理办法：校准电子定时器精确指定时间。
问题⑶：常用制备缓冲液的蒸馏水出现问题；
处理办法：采用新鲜的符合标准的蒸馏水。
问题⑷：添加抗体/酶的稀释液溶液浓度太低；
处理办法：遵循使用中'海说明书介绍贮存试剂盒和精确制备工作液。校准移液器，吸嘴要匹配，装吸嘴时要紧密。
问题⑸：酶标仪滤色片不符合规定的；
处理办法：常规检查酶标仪采用的滤色片。
问题⑹：ELISA试剂盒没能有效充分的稳定平衡；
处理办法：ELISA实验试剂在常温稳定平衡不低于二十分钟左右，切实保障全部实验试剂已稳定平衡至在常温。
问题⑺：不符合规定的的实验试剂贮存方式办法；
处理办法：遵循使用说明书介绍规范要求贮存试剂盒。
㈡试验检测的标准曲线和测定办法的重复性差，那究竟是怎么回事造成的？
它主要是由测定办法实际操作造成的问题现象，主要根本因素如下所示：
问题⑴：加样本及实验试剂量不准确；板孔不一致；
处理办法：校准移液器，吸嘴要匹配，装吸嘴时要严密。反复某一产品的样品时，加样时长尽量避免与首次贴近；反复检测生物标本，技术人员操作办法维持不变，减少出现结果不同的几率原因；产品的样品稀释前须有效充分的混合均匀。
问题⑵：加样过快，板孔产生污染源；
处理办法：反复测定办法生物标本，实际操作前提条件是中海生物技术人员等应尽量避免与之前维持不变，以解决这类因素带来的不一致的概率；注意加样千万别过快。
问题⑶：错加样本；
处理办法：检查记录和实验试剂，有没有错加样本。
问题⑷：加样本及实验试剂时，放在孔壁上部非包被区；
处理办法：加样枪嘴千万别贴容器壁。
问题⑸：不一样生产批号试剂盒中成分混合使用；
处理办法：不一样生产批号试剂盒中成分不能够混合使用。
问题⑹：温育时长、洗板、显色时长不一致；
处理办法：中.海常规检查时长有没有相同。
问题⑺：孔内污染源杂质；
处理办法：离心产品的样品，解决杂质。
问题⑻：实验试剂/产品的样品没能混合均匀；
处理办法：有效充分的混合均匀产品的样品和实验试剂。
问题⑼：血清生物标本未充分凝结即添加，反应孔内存在纤维蛋白凝结或存留血细胞，易存在假阳性反应等。
处理办法：待血清生物标本充分凝结后做试验检测。
㈢试验检测结论白板，同时阳性对照不显色，应怎样研究和搜索根本原因？
试验检测结果显示白板，同时阳性对照不显色，普遍根本原因如下所示：
问题⑴：漏加或是误加实验试剂；
处理办法：常规检查试验检测记载和余下的实验试剂。次次加液前均应核查标签贴。
问题⑵：实验试剂逾期；
处理办法：采用有效期限内的中海产品。
问题⑶：发现洗板液制备中如容量瓶不干净含HRP酶抑制物等情况；
处理办法：中海生物技术采用干净整洁的容器，科学合理制备实验试剂。
问题⑷：温育的时长或环境温度不足；
处理办法：校准温育箱环境温度。
问题⑸：标准品失活或是丟失；
处理办法：标准品科学合理储存、充分均匀溶解和混匀。
问题⑹：抗体失活或是丟失；
处理办法：替换抗体或是提升抗体浓度值
问题⑺：酶失活或是丟失
常规检查手段：把正常浓度值的酶再进行稀释二十至一百倍，取五微升添加五十微升的显色底物，结束后显色有没有能到达壹上下，可做为酶的大概估测。
处理办法：替换酶或是提升酶的浓度值。
问题⑻：显色底物失活
常规检查手段：加一定量的工作浓度值的酶，TMB有没有快速显色。
解决办法：替换显色底物.
㈣试验检测结果显示空白背景高，其普遍根本原因如下所示：
问题⑴：洗板不干净；
处理办法：充分的清洗，完全拍干；洗板要杜绝交叉式造成污染；浓缩洗液准确无误制备；吸嘴最好使用一次；加样和加酶拍板的滤纸应丢掉不用，更不要多次采用，不然易产生造成污染。
问题⑵：显色液发生变质或是实验试剂逾期；
处理办法：常规检查试剂盒有效期限。
问题⑶：实验试剂进行稀释不正确，如加酶的浓度值过高；
处理办法：请按照中 海使用说明书所述的稀释倍数制备；
问题⑷：蒸溜水受酶等造成污染；
处理办法：中海生物采用新鲜的蒸溜水；
问题⑸：实验试剂混合使用；
处理办法：不一样生产批号实验试剂勿混合使用。
问题⑹：恒温培养箱环境温度高于三十七摄氏度或持续时间太久。
处理办法：显色反应时长尽可能减少。
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