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    ELISA实验中两种洗板方法介绍

    日期:2022-06-21 | 中海生物技术文库 | 浏览:122 次

    中海生物在ELISA实验操作中,洗板有手动洗板和洗板机洗板两种方法,两者没有本质区别。只需操作符合规范标准,就可获得准确可靠的实验结论。

     

     手动洗板是指在每次反应温育后,将反应溶液吸出或干燥,然后用洗涤液填充板孔。静置两三分钟后,将洗涤液吸出或晾干,然后在吸水纸上拍干。重复上述洗涤步骤三四次,最后在吸水纸上拍干。人工洗板人为因素大,实验者必须经验丰富,洗的次数要足够,冲击力不能太大。洗涤液的加入量应限制在刚好充满反应孔,以防止孔开口处的游离酶被洗去,同时防止液体在孔间交叉。洗完后扣干也很重要,否则容易造成假阳性。每次洗完板后,用吸水纸轻轻拍干,垂直做决定,避免交叉感染。不要用力过猛,防止抗原抗体复合物分离;吸水纸应该是一次性的,使用不易脱落碎屑的吸水纸为宜。酶缀合物不耐干燥,尤其是在较高温度下,因此更容易失活。所以应尽可能缩短干燥后的反应板在空气中的暴露时间。时间越长,吸光度值越低。

     

      洗板机是将人工操作变成洗板机工作,人为因素少/速度快/条件恒定。但是用洗板机洗板有一个特点就是每次洗板后都干不了,所以液体残留比较多,需要增加洗板次数来减少这个物种误差。洗板机洗板次数越少,假阳性率越高。本次实验,洗一次板,假阳性率高达90%。洗板两次后,假阳性率为38%。洗板三次假阳性率为2。洗板四五次,未发现假阳性。盘子洗的次数越多越好。次数太多不仅浪费人力物力,还会导致假阴性结果。所以一般试剂盒要求洗板四五次。洗板时,洗衣机要经常检查洗头是否通畅。如果被杂物堵塞,可以用注射器针头挑出来。为了达到更好的洗涤效果,实验室可以采用机洗和手工洗涤相结合的方法。机洗后进行一两次手动洗板,可达到理想的洗板效果。

     


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