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    非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的使用及注意事项

    日期:2023-11-21 | 中海生物技术文库 | 浏览:538 次

    非瘟ELISA抗体检测试剂盒的原理

    酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA)指将抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的检测方法。其基本原理如图1所示。目前,非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的原理主要有三种,分别是间接法、阻断法(竞争法)和双抗原夹心法。

    1. 间接法

    间接法通常用于测定血清中的IgG抗体,由于只要获得抗原,配合通用的酶标抗猪IgG的二抗就可以快速建立ELISA方法。产品性能取决于抗原的纯度,抗原纯度不够会导致非特异IgG的结合,产生假阳性。其主要原理如图2所示。

    2. 阻断法

    阻断法又叫竞争法,通常用于测定血清中的IgG抗体。阻断ELISA需要抗原和特异性的单抗或多抗。对抗原的纯度要求不高,产品的性能取决于单抗或多抗的特异性和亲和力。背景干扰低,特异性高。阻断ELISA方法的原理如图3所示。

    3. 双抗原夹心法

    双抗原夹心ELISA用于测定血清中IgG、IgM、IgA等总抗体。技术难度最高,需要制备高质量的酶标抗原。该方法不受非特异性IgG的干扰,背景干扰小,敏感性和特异性高。其原理如图4所示。

    非瘟ELISA抗体

    试剂盒使用的注意事项

    非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒的使用及其操作步骤详见试剂盒说明书。另外,在使用试剂盒时,应注意以下事项:

    1. 检测样本的注意事项

    如果样本处理或保存不当,会出现溶血等情况,红细胞破裂,血红蛋白溢出,红细胞中的各种蛋白和酶使血清成分变的复杂,尤其亚铁血红素具有HRP酶的作用,从而会影响检测结果。

    样品溶血主要由以下原因造成:①采血后,不离心,连同针管一同邮寄;②采血后,低温冷冻,然后解冻;③采血后,未及时静置,有剧烈震荡的情况。

    避免溶血应注意以下几点:①采血后,静置2h以上 (室温),或采血后,静置30min后再离心(离心过早,胶冻样血清),静置或离心出血清后,及时分装到EP管中妥善保存。②冷链运输样本;③样本的保存:室温不超过8h,4℃不超过5天,-20℃可长期保存;④检测时,应充分回温并混匀,避免反复冻融;⑤严格按照试剂盒的稀释比例,稀释血清样品。

    2. 检测环境的控制

    检测期间,注意实验室的温度、光照和通风情况,应保证在室温(18℃~25℃)条件下操作,不在太阳直射或空调出风口下试验。操作桌面应保持整洁,无挥发性液体。

    3. 规范样本稀释、加样、转移等操作规程

    加样用样本的稀释,应先加稀释液,再加待检血清。

    加样期间,所加物应加注到ELISA板孔底部,不要黏附在孔壁上。板孔内液体轻轻摇晃,不要将液体溅出孔外,更不要产生气泡,避免有弱阳性样品显假阴性。

    正确使用移液枪,确保移液枪的量程准确,移液枪头与移液枪是否匹配,移液的过程中尽量避免气泡的产生。建议采用“吸二打一”的方式,“吸二打一”的方法:也就是吸液时移液器按到底,打液时,按到移液器第一个停止位置,慢吸液体,快速打下液体,枪头需垂直于板孔,不可插入板孔,避免溶液挂壁和交叉污染。

    4. 洗板应注意的问题

    按说明书操作,确保每孔所加洗涤液量的准确和均一,间隔30s,人工清洗需5次,机洗3次即可,调好针头与孔底的距离,过多会溢出板孔,污染其它样本,过少则达不到洗涤的效果。

    快速甩尽板孔内的液体。防止板孔里的液体对流,产生交叉污染,最后一次洗板后,用吸水纸垫厚毛巾拍干。拍干后观察板孔,未被清除的气泡用未使用过的枪头戳破或洗耳球轻轻吹破。

    5. 试剂盒使用的注意事项

    试剂盒应在2-8℃保存,不要贴冰箱壁,避免结冻。板条若未能一次用完,剩余板条用塑料袋封口后密封2-8℃保存。

    试剂盒使用前应提前拿出至室温,待回温后方可使用,回温时不要使用水浴或温箱回温。

    使用前充分混匀,吸出的多余液体禁止倒回。

    为确保检测的结果准确,不同批次的试剂盒的试剂成分都要经过优化处理,同时要避免不同批次间的试剂盒成分的混合使用。


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-fzzwkt.html


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