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    鸡传染性支气管炎病毒(M41株)血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清使用说明书

    日期:2023-12-05 | 中海生物技术文库 | 浏览:558 次

    本抗原系用鸡传染性支气管炎病毒(M41株)接种SPF鸡胚,收获尿囊液,经A型魏氏梭菌菌液活化制成。血凝效价不低于1:128,用于检测鸡传染性支气管炎的抗体;阳性血清系用M41株病毒接种SPF鸡制备的免疫血清;阴性血清为SPF鸡血清。

     

    用法与判定

    1  IB HA工作抗原的制备

    1.1  IB HA 抗原效价测定

    1.1.1  用移液器在96孔微量板上从第1孔至第12孔,依次加入30μl稀释液。

    1.1.2  30μl IB HA抗原加入第1孔,依次作2倍系列稀释至第11孔后弃去30μl稀释液,各孔均应混合均匀。

    1.1.3  每孔加入1%鸡红细胞悬液30μl,再补加30μl稀释液(保证与HI试验同反应体积),同时设立红细胞悬液对照孔。

    1.1.4  96孔板至振荡器上振荡10s,置2~8作用45min60min分钟,判定结果。判定时,将微量板倾斜45°30s内观察结果,对照孔红细胞应完全沉淀到孔底并呈泪珠样流滴(不凝集—)HA阳性孔红细胞应均匀分布于孔内(完全凝集#)或少量沉淀但不呈泪珠样流滴(不完全凝集++),使红细胞完全凝集的最大稀释倍数判为该抗原的HA效价。

    上表所示血凝抗原的血凝价为1:128

    1.2. 抗原工作液配制及检验

    1.2.1  4HA单位(4HAU)的工作抗原的配制:如果IB HA抗原的HA效价测定结果为1:128,则4HA单位为128/4=32,将HA抗原用稀释液稀释32倍,即为4HA单位的工作抗原液。

    1.2.2  回归试验:在96V型板中选取64行,每列均加入30μl PBS,第2列加入60μl PBS,第6列加入120ul PBS。在第1列前3行中加入稀释好的4HAU 30μl2倍稀释),用移液器(排枪)反复吹打10次后,吸取30μl加入第3列(4倍稀释),反复吹打10次后吸取30μl加入第5列(8倍稀释),反复吹打10次后,弃去30μl

    在第2列前3行中加入稀释好的4HAU 30μl3倍稀释),用移液器反复吹打10次后,弃去30μl,再吸取30μl加入第4列(6倍稀释),反复吹打10次后,弃去30μl。在第6列前3行中加入稀释好的4HAU 30μl5倍稀释),用移液器反复吹打10次后,弃去120μl,每孔加入30μl PBS,再加入30μl 1%红细胞悬液,室温静置30min45min,对照孔的红细胞全部沉淀时,观察判读结果。

    1.2.3  4单位抗原配制:根据回归试验结果,配制4HAU。例如回归试验结果为1:5,则将抗原稀释40倍(假设抗原血凝效价为1:128,初步4单位抗原为1:32,根据回归结果,抗原应稀释倍数为32×5÷4即可,也应采用两步稀释法)。

    2 血凝抑制试验(HI

    2.1 血凝板每排检测1份被检血清,设阳性血清与阴性血清对照。

    2.2 1孔~第10孔,每孔加入30μl PBS,第11孔加入30μl(抗原对照孔),第12孔加入60μl(红细胞对照孔)。

    2.3 取待检血清30μl加入第1孔中(悬空加入,枪头弃去,更换新枪头进行稀释),用移液器对待检血清作倍比稀释至第10孔:即将第1孔用移液器反复吹吸10次后,吸出30μl移至第2孔,再反复吹吸10次后,吸出30μl移至第3孔,依此类推至第5孔更换一次枪头,继续稀释至第10孔,从第10孔中吸出30μl弃去,如表3

    2.4 111孔,每孔加入4 HAU 30μl,轻微振荡后置于2~8反应30min

    2.5补加红细胞及试验结果判定:作用30min后将配制好的1%鸡红细胞加入各板中,30μl/孔,置于2~8作用,反应30~45min(红细胞对照完全沉淀时)读取HI试验结果,读取完全中和孔的稀释倍数(45°角倾斜板,10s内红细胞呈泪滴状下滑,周围液体清亮无混浊)做为判定结果。

            

    上表所示待检血清抑制价1:64

    注意事项

    1. 试剂盒储存于2~8,使用前不需要回温,试验结束后放回2~8保存

    2. 试验应在室温条件下进行,每次检测时应设阳性、阴性血清(稀释方法同被检血清)及红细胞对照。

    3. 抗原工作液应现配现用,使用时必须充分摇匀。

    4. 应将使用剂量的抗原无菌吸出,剩余抗原及时放回冰箱保存。

    5. 只用于检测鸡血清,不能用于鸡全血反应。

    规格 抗原 1ml/瓶,1瓶;稀释液 200ml/瓶,1瓶;阳性血清1ml瓶,1瓶;阴性血清1ml/瓶,1瓶。

    贮藏与有效期 28保存,有效期为24个月。

    生产企业 中海生物科技有限公司

    仅在兽医指导下使用


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-jcrxzqgy.html


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