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    配制培养基时的注意事项以及常见问题分析

    日期:2023-10-25 | 中海生物技术文库 | 浏览:353 次

    一、配制培养基时的注意事项

     

    01

    培养基在灭菌前,需进行加热溶解(含琼脂的培养基需煮沸4-6次至琼脂完全溶解),再进行分装灭菌(应不超过1000mL);

    02

    含琼脂培养基,若灭菌前未进行加热溶解,灭菌后需充分摇匀使用;

    03

    所有培养基不宜灭菌过度和长时间保温,特别是含糖量高的培养基,如沙氏葡萄糖琼脂,灭菌过度或保温时间过长易使葡萄糖发生焦化,灭菌后的培养基颜色会变深,pH会下降,此外还会使蛋白胨中的维生素分解,降低培养基的营养;

    04

    需另加添加剂的培养基通常在培养基冷却至50℃左右时加入,已加入添加剂的琼脂类培养基不可熔化再次使用;

    05

    配制好的培养基需及时灭菌,不可久置;

    06

    培养基不可重复灭菌;

    07

    琼脂培养基不可反复熔化使用;待用的琼脂培养基可置47-50℃水浴保温或50-60℃烘箱保温,一般不可超过4小时;

    08

    使用蒸馏水或纯化水配制。饮用水或自来水中由于含矿物盐离子,配制培养基会产生浑浊现象;

    09

    容器不易过满,容量至少应比培养基体积大20%。

     

    二、配制过程中的常见问题分析

     

    01
    培养基颜色不正确

    (1)含有酸碱指示剂的培养基,若颜色不正确,通常是由于pH不正确导致的,加热过度、错误的灭菌方式等都会导致此项问题。

    (2)加热过度导致某些成分分解或糖焦化,如SC培养基加热过度会变红,含糖量高的培养基,加热过度通常会出现颜色加深,呈焦糖色或棕褐色。

    (3)某些成分变质,如血液久置易变黑,制成的平板颜色偏棕黑色。

     

    02
    培养基不凝固或凝固性差

    (1)称量错误

    (2)琼脂分布不均匀

    (3)培养基pH不正确

    (4)加热过度

    (5)琼脂量不足

    灭菌前未加热溶解,灭菌后未充分摇匀,

    会出现分层现象,琼脂凝固在底层,上层不凝固

    03
    培养基产生沉淀

    (1)某些培养基原本就含有不溶性沉淀,如TTB,MC培养基等,配方中含有大量不溶性碳酸钙。

    (2)灭菌前未充分溶解,如Fraser培养基中含有大量磷酸盐,若灭菌前溶解不充足,灭菌后就会出现大量沉淀。

    (3)pH不正确,偏酸或偏碱都有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。

    (4)水的纯度不够,天然水中含有较多的矿物盐离子,若未除净,则易与培养基中的磷酸盐反应生成沉淀。

    (5)添加剂加入温度不正确,卵黄、血液等对温度敏感的添加成分,若加入时温度过高或温差过大,易出现凝块。

    (6)称量错误。

    (7)试剂加入顺序不正确

    04
    培养基污染

    (1)灭菌方式不正确,导致灭菌不彻底

    (2)灭菌锅的灭菌效力不达标

    (3)灭菌量过多,灭菌前未加热溶解

    (4)培养基本身含耐热菌较多

    (5)灭菌过程中,灭菌锅内冷空气未排干净

    (6)灭菌锅放置过满

    (7)操作过程发生污染

    (8)分装培养基器皿灭菌不充分

    (9)滤膜破损


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