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    无血清支原体培养基培养基检验方法

    日期:2023-12-07 | 中海生物技术文库 | 浏览:337 次

    无血清支原体培养基培养基检验

    1. 质控菌株 检验用质控菌株为猪鼻支原体 BTS-7 株。将冻干种子恢复原量以 10%的

    量接种无血清支原体液体培养基(使用前加入 10%血清),经 35~37℃培养至变色,作为第

    1 代;将第 1 代培养基物按 10%接种量接种无血清支原体液体培养基(使用前加入 10%血清),

    35~37℃培养 12~72h,取活菌滴度≥108CCU/ml 培养物作为工作种子。在使用过程中冻干种

    子传代次数不超过 5 代,工作种子在-20℃以下保存有效期为 20 日。

    2. 检验方法

    2.1 灵敏度试验

    (1)培养 取工作种子液用待检液体培养基进行 10 倍系列稀释至 10-10,另设 1 支未接

    种液体培养基作为对照,置 35~37℃培养 5~7 日;取 10-6 稀释度菌液 0.2ml 接种于固体培养

    基平板 1 个,另设 1 个未接种固体培养基平板作为对照,置 37℃、5%CO2培养箱中培养 5~7

    日。同时各做 2 组重复。

    (2)结果判定 以培养基呈现生长变色的最高稀释度作为其灵敏度。如果 2 组培养基灵

    敏度均≥10-8,对照不变色;固体培养基均有支原体菌落生长,对照无支原体菌落生长,判

    培养基合格。若仅 1 组液体培养基灵敏度≥10-8,或 1 组固体培养基有支原体菌落生长,取

    2 倍待检品重检。重检后,如液体培养基灵敏度均≥10-8,固体培养基均有支原体菌落生长,

    判为合格。否则,判为不合格。


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