羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书
日期:2022-04-26 | 中海生物技术文库 | 浏览:981 次
【作用与用途】
羊布鲁氏菌抗体检测试剂盒(GS.Brucellosis Antibody Test Kit)用于检测羊血清中的羊布鲁氏菌特异性抗体,用于羊的血清学诊断。
【检测原理】
羊布鲁氏菌抗体检测试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被羊布鲁氏菌抗原。在实验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有羊布鲁氏菌特异性抗体,则与酶标板上抗原结合。经洗涤后除去未结合的抗体和其他成分后,再加入酶结合物,与酶标板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔板中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。
【主要成分与含量】
抗原包被板 | 1板/2板 | 底物B液 | 12 mL |
阴性对照 | 2 mL | 终止液 | 12 mL |
阳性对照 | 2 mL | 10×浓缩洗涤液 | 75 mL |
酶结合物浓缩液 | 0.24 mL | 盖板膜 | 1张/2张 |
酶结合物稀释液 | 24 mL | 血清稀释板 | 1块/2块 |
样品稀释液 | 60 mL | 说明书 | 1份 |
底物A液 | 12 mL |
【需自备的材料】微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm)、去离子水、离心机(4000 rpm)、恒温培养箱(25℃)、计时器等。
【用法与判定】
1、用法
1.1 试剂配制
洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作10倍稀释(例如:75 mL的浓缩洗涤液加上675 mL蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。
1.2 样本处理
① 取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm离心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。
② 在血清稀释板中按1:50稀释待检血清样品(如245 µL样品稀释液中加5 µL待检血清样品),充分混匀。
注:阴、阳性对照不用稀释。
1.3 操作步骤
① 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100 µL加至抗原包被板中。同时设阴性对照2孔、阳性对照2孔,取阴性、阳性对照各100 µL分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)温育30min。
② 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300 µL,静置30 s后,弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干。
③ 配制酶结合物工作液:按体积比1:100(1份酶结合物浓缩液+99份酶结合物稀释液)混匀备用。
④ 每孔加酶结合物工作液100 µL,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应30 min。
⑤ 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同②。
⑥ 将底物A液与底物B液按1:1混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应10 min。
⑦ 每孔加入终止液50 µL,5 min内测定结果。
2、判定
在酶标仪上读各孔OD450nm值。
① 试验成立的条件:
阴性对照平均OD450nm值<0.20且阳性对照平均OD450nm值≥1.0,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。
② 计算方法:
S/P= |
样品OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值 |
阳性对照平均OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值 |
③ 阴阳性判断:
S/P<0.4时,判为阴性;S/P≥0.4时,判为阳性。
【注意事项】
1、羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回2~8℃保存。
2、不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。
3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。
4、待检血清数量较多时,应先稀释完所有待检血清,再加到抗原包被板上,使反应时间一致。
5、稀释10×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。
6、移液时,应尽量准确,防止产生气泡。
7、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为12个月。
【规格】96孔/盒;192孔/盒
【生产企业】 北京中海生物科技有限公司
中海生物技术(枣庄)有限公司
网址:www.zhzbio.com
仅供兽医诊断使用
产品链接:https://www.zhzbio.com/product/niuyang-yblsjsjh.html
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