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    羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书

    日期:2022-04-26 | 中海生物技术文库 | 浏览:48 次

    【作用与用途】

    羊布鲁氏菌抗体检测试剂盒(GS.Brucellosis Antibody Test Kit)用于检测羊血清中的羊布鲁氏菌特异性抗体,用于羊的血清学诊断。

    【检测原理】

    羊布鲁氏菌抗体检测试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被羊布鲁氏菌抗原。在实验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有羊布鲁氏菌特异性抗体,则与酶标板上抗原结合。经洗涤后除去未结合的抗体和其他成分后,再加入酶结合物,与酶标板上的抗原抗体复合物发生特异性结合。再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔板中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。

    【主要成分与含量】

    抗原包被板 1板/2板 底物B液 12 mL
    阴性对照 2 mL 终止液 12 mL
    阳性对照 2 mL 10×浓缩洗涤液 75 mL
    酶结合物浓缩液 0.24 mL 盖板膜 1张/2张
    酶结合物稀释液 24 mL 血清稀释板 1块/2块
    样品稀释液 60 mL 说明书 1份
    底物A液 12 mL

    【需自备的材料】微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm)、去离子水、离心机(4000 rpm)、恒温培养箱(25℃)、计时器等。

    【用法与判定】

    1、用法

    1.1 试剂配制

    洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作10倍稀释(例如:75 mL的浓缩洗涤液加上675 mL蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。

    1.2 样本处理

    ① 取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm离心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。

    ② 在血清稀释板中按1:50稀释待检血清样品(如245 µL样品稀释液中加5 µL待检血清样品),充分混匀。

    注:阴、阳性对照不用稀释。

    1.3 操作步骤

    ① 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100 µL加至抗原包被板中。同时设阴性对照2孔、阳性对照2孔,取阴性、阳性对照各100 µL分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)温育30min。

    ② 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300 µL,静置30 s后,弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干。

    ③ 配制酶结合物工作液:按体积比1:100(1份酶结合物浓缩液+99份酶结合物稀释液)混匀备用。

    ④ 每孔加酶结合物工作液100 µL,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应30 min。

    ⑤ 弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同②。

    ⑥ 将底物A液与底物B液按1:1混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)避光反应10 min。

    ⑦ 每孔加入终止液50 µL,5 min内测定结果。

    2、判定

    在酶标仪上读各孔OD450nm值。

    ① 试验成立的条件:

    阴性对照平均OD450nm值<0.20且阳性对照平均OD450nm值≥1.0,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

    ② 计算方法:

    S/P=

    样品OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值
    阳性对照平均OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值

    ③ 阴阳性判断:

    S/P<0.4时,判为阴性;S/P≥0.4时,判为阳性。

    【注意事项】

    1、羊布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回2~8℃保存。

    2、不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

    3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

    4、待检血清数量较多时,应先稀释完所有待检血清,再加到抗原包被板上,使反应时间一致。

    5、稀释10×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。

    6、移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

    7、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

    【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为12个月。

    【规格】96孔/盒;192孔/盒

    【生产企业】  北京中海生物科技有限公司

                  中海生物技术(枣庄)有限公司  

                  网址:www.zhzbio.com  

    仅供兽医诊断使用


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-yblsjelisa.html


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