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    猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书

    日期:2022-07-05 | 中海生物技术文库 | 浏览:297 次

    【名称】

    猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书

    【作用与用途】

    猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒(Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test)用于检测猪血清中的CSFV特异性抗体,评估养猪场CSFV疫苗免疫状况以及感染猪的血清学辅助诊断。

    【检测原理】

    本试剂盒采用阻断ELISA法,在酶标板条微孔上预包被猪瘟病毒抗原。在实验中,加入样品稀释液和待检血清,经过温育后,若样品中含有CSFV特异性抗体,则与包被板上抗原结合。经洗涤后除去未结合的抗体和其他成分后,再加入酶标抗体,样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上的抗原结合。再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔板中加入底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。

    【主要成分与含量】

    抗原包被板 1 板/2 板 底物 A 液 12 mL
    阴性对照 2 mL 底物 B 液 12 mL
    阳性对照 2 mL 终止液 12 mL
    酶标抗体浓缩液 0.24 mL 10×浓缩洗涤液 75 mL
    酶标抗体稀释液 24 mL 盖板膜 1 张/2 张
    样品稀释液 15 mL 说明书 1 份

    【需自备的材料】 去离子水、微量移液器、酶标仪(450 nm)、计时器、离心机(4000 rpm)等。

    【用法与判定】

    1、用法

    1.1 试剂配制

    洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5~10 min),然后用蒸馏水作 10 倍稀释(例如:75mL 的浓缩洗涤液加上675mL 蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液 2~8℃可存放 7 日。

    1.2 样本处理

    取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm 离心 10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。注:阴、阳性对照不用稀释。

    1.3 操作步骤

    ① 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),设阴、阳性对照各 2 孔,取阴性、阳性对照各 100 µL 分别加入反应孔中。其他孔加入样品稀释液 50 µL/孔,然后加入待检血清 50 µL/孔。轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,37℃避光反应 30 min。 ② 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液 300 µL,静置1min 后,弃去洗涤液。洗涤 4 次后在吸水纸上拍干。

    ③ 配制酶标抗体工作液:按体积比 1:100(1 份酶标抗体浓缩液+99 份酶标抗体稀释液)混匀备用。

    ④ 每孔加酶标抗体工作液 100 µL,盖上盖板膜,37℃避光反应30 min。 ⑤ 弃去孔中的溶液,洗涤 4 次,方法同②。

    ⑥ 将底物 A 液与底物 B 液按 1:1 混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,37℃避光反应 10 min。 ⑦ 每孔加入终止液 50 µL,5 min 内测定结果。

    2、判定

    在酶标仪上读各孔 OD450nm 值。

    ① 试验成立的条件:

    阴性对照平均 OD450nm 值≥1.0 且阳性对照 P(阻断率)≥ I 50%,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

    ② 计算方法:

    PI(阻断率)=100%-(样品 OD 值÷阴性 OD 均值)×100%

    ③ 阴阳性判断:

    PI≥40%时,判为阳性;PI<40%时,判为阴性。

    【注意事项】

    1、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回 2~8℃保存。

    2、不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

    3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。

    4、稀释 10×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。

    5、移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

    6、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

    【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为 12 个月。

    【规格】96 孔/盒;192 孔/盒

    【生产企业】

    北京中海生物科技有限公司

    中海生物技术(枣庄)有限公司

    网址:www.zhzbio.com

    仅供兽医诊断使用

     


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-zwbdzdelisa.html


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