猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书
日期:2022-07-05 | 中海生物技术文库 | 浏览:2147 次
【名称】
猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用操作说明书
【作用与用途】
猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒(Blocking ELISA Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody test)用于检测猪血清中的CSFV特异性抗体,评估养猪场CSFV疫苗免疫状况以及感染猪的血清学辅助诊断。
【检测原理】
本试剂盒采用阻断ELISA法,在酶标板条微孔上预包被猪瘟病毒抗原。在实验中,加入样品稀释液和待检血清,经过温育后,若样品中含有CSFV特异性抗体,则与包被板上抗原结合。经洗涤后除去未结合的抗体和其他成分后,再加入酶标抗体,样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上的抗原结合。再经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔板中加入底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450 nm波长测定反应孔中的吸光度OD值。
【主要成分与含量】
抗原包被板 | 1 板/2 板 | 底物 A 液 | 12 mL |
阴性对照 | 2 mL | 底物 B 液 | 12 mL |
阳性对照 | 2 mL | 终止液 | 12 mL |
酶标抗体浓缩液 | 0.24 mL | 10×浓缩洗涤液 | 75 mL |
酶标抗体稀释液 | 24 mL | 盖板膜 | 1 张/2 张 |
样品稀释液 | 15 mL | 说明书 | 1 份 |
【需自备的材料】 去离子水、微量移液器、酶标仪(450 nm)、计时器、离心机(4000 rpm)等。
【用法与判定】
1、用法
1.1 试剂配制
洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在 37℃恒温培养箱中加热 5~10 min),然后用蒸馏水作 10 倍稀释(例如:75mL 的浓缩洗涤液加上675mL 蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液 2~8℃可存放 7 日。
1.2 样本处理
取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm 离心 10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。注:阴、阳性对照不用稀释。
1.3 操作步骤
① 取抗原包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),设阴、阳性对照各 2 孔,取阴性、阳性对照各 100 µL 分别加入反应孔中。其他孔加入样品稀释液 50 µL/孔,然后加入待检血清 50 µL/孔。轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,37℃避光反应 30 min。 ② 弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液 300 µL,静置1min 后,弃去洗涤液。洗涤 4 次后在吸水纸上拍干。
③ 配制酶标抗体工作液:按体积比 1:100(1 份酶标抗体浓缩液+99 份酶标抗体稀释液)混匀备用。
④ 每孔加酶标抗体工作液 100 µL,盖上盖板膜,37℃避光反应30 min。 ⑤ 弃去孔中的溶液,洗涤 4 次,方法同②。
⑥ 将底物 A 液与底物 B 液按 1:1 混合,加入孔中,100 µL/孔,盖上盖板膜,37℃避光反应 10 min。 ⑦ 每孔加入终止液 50 µL,5 min 内测定结果。
2、判定
在酶标仪上读各孔 OD450nm 值。
① 试验成立的条件:
阴性对照平均 OD450nm 值≥1.0 且阳性对照 P(阻断率)≥ I 50%,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。
② 计算方法:
PI(阻断率)=100%-(样品 OD 值÷阴性 OD 均值)×100%
③ 阴阳性判断:
PI≥40%时,判为阳性;PI<40%时,判为阴性。
【注意事项】
1、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温。使用后放回 2~8℃保存。
2、不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。
3、底物液和终止液不能暴露于强光或接触氧化剂。
4、稀释 10×浓缩洗涤液时,如发现有结晶,应加热使其溶解后再使用。
5、移液时,应尽量准确,防止产生气泡。
6、应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为 12 个月。
【规格】96 孔/盒;192 孔/盒
【生产企业】
北京中海生物科技有限公司
中海生物技术(枣庄)有限公司
网址:www.zhzbio.com
仅供兽医诊断使用
猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒(点击查看)
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