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    大肠杆菌O抗原定型血清说明书(固体)-中海生物

    日期:2023-12-26 | 中海生物技术文库 | 浏览:119 次

    系用大肠杆菌菌株灭活抗原接种健康兔,采血,分离血清,标化,经冷冻干燥制成冻干血清。

    【性状】本品为白色、淡黄色或淡红色疏松团块。

    【作用与用途】用于大肠杆菌O抗原血清型鉴定。

    【用法与判定】

    1.血清的稀释

    多价血清的配制:将多种大肠杆菌O抗原定型血清分别用0.5%石炭酸生理盐水恢复原量(1mL)后混合,装入青瓶,盖紧。

    单因子血清的配制:将一种大肠杆菌O抗原定型血清溶解于5mL 0.5%石炭酸生理盐水(视为15稀释),装入小瓶,盖紧。

    2.抗原的制备

    平板凝集抗原制备:将被检菌株划线接种于麦康凯琼脂平板,置37℃培养24小时。在麦康凯琼脂平板上挑选光滑圆整菌落,接种普通琼脂斜面,37℃培养24小时。用1.52.0mL石炭酸生理盐水将普通琼脂斜面培养物全部洗下,收集于一小试管中,于121℃高压2小时,破坏其“K”抗原。

    试管凝集抗原制备:将被检菌株划线接种于麦康凯琼脂平板,置37℃培养24小时。在麦康凯琼脂平板上挑选光滑圆整菌落,接种普通琼脂斜面,37℃培养24小时。取普通琼脂斜面培养物接种普通肉汤培养基(100mL),置37℃振荡培养815小时。培养物于121℃高压2小时,破坏其“K”抗原。

    3.平板凝集反应

    抗原先与大肠杆菌O抗原多价定型血清进行平板凝集反应,然后再与大肠杆菌O抗原定型血清进行平板凝集反应。即抗原和血清各取50uL于玻璃板上混匀,涂成直径约2cm的圆膜,1分钟中内出现明显凝集颗粒判定为“阳性”。同时以抗原与0.5%石炭酸生理盐水混合物作对照,观察有无自凝集现象。

    4.试管凝集反应  

    1排小圆底试管中先加稀释液0.5%石炭酸生理盐水,第1管加1.5mL,从第2管起各管加0.5mL,然后在第1管加入大肠杆菌O抗原定型血清(1:5)0.5mL,混匀后,从第1管吸取0.5mL,加入到第2,依次作1:201:401:801:1601:320……1:10240系列稀释,然后各管加抗原0.5mL,振荡使血清和抗原充分混匀,放入37℃温箱1820小时,取出后在室温静置2小时,记录每管的反应情况。如凝集价高于或等于1640(第5管)即可判定为“阳性”。每个试验均应设有被检抗原+0.5%石炭酸生理盐水对照。

      结果判定:

       “#”  ——液体完全透明,管底覆盖明显的伞状凝集沉淀物。

       “+++”——液体略呈混浊,管底伞状凝集沉淀物明显。

       “++” ——液体呈中等程度混浊,管底有中等量伞状凝集沉淀物。

       “+”  ——液体不透明或透明度不明显,有不显著的伞状凝集沉淀物。

     “-”  ——液体混浊,无任何凝集沉淀物,细菌可能沉于管底,呈光滑圆盘状,振荡时呈均匀混浊。

    最终结果判定:以++”作为被检抗原的效价终点。

     【规格】1ml/

    【贮藏与有效期】溶解后的血清在28℃保存,有效期为12个月。


    本文链接:https://www.zhzbio.com/news/wenku-dcgtoky.html


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