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    固体培养基中的凝固剂琼脂(Agar)相应知识

    日期:2022-05-24 | 中海生物技术文库 | 浏览:51 次

    琼脂(Agar)有着特殊的熔点和凝固点,其成分无法被微生物分解利用,没有抑制性成分。因而比较适合用以微生物培养基的配制,故此是固体培养基最经常使用的凝固剂。迄今为止,当今世界尚未有能完全取代琼脂的替代物。

    某些早期做植物组织培养或微生物培养的人,尤其是新手入门,在制备时常常会面临培养基无法正常凝固的状况:呈半流体或完全液态,与此同时会出现各种颜色。本篇文章中海生物技术将简单阐述琼脂的凝固性及影响其凝固性的主要因素,并根据不一样的操作步骤做一个叙述式的评述,以方便更多人在实际工作过程中彻底解决相应问题,事半功倍。

    ㈠琼脂基础知识

    琼脂(Agar)又称果冻粉,因其最开始是在日本藻类中提炼而被称为洋菜。成品琼脂为白色或淡黄色粉末或细条状,具体由复杂的大分子多糖类组成。其水解产物由40%的D-半乳糖、3%硫酸盐和2%丙酮酸组成。实际上是琼脂糖和琼脂糖的混合物。琼脂胶是琼脂糖的硫酸盐,琼脂糖具体借助氢键的引力构成网状结构。因而,琼脂糖凝胶的稳定性好于哪些利用化学键交联构成网络结构的琼脂糖凝胶,其凝结剂的稳定性差。

    琼脂(Agar)溶于热水而不溶于冷水,因而在制备培养基时须要煮沸琼脂。伴随着温度的升高,琼脂逐渐溶解,当温度降至40℃时,开始凝固。制备培养基时须要注意的是,考虑到各地生产的琼脂质量不一样,同一浓度的琼脂水溶液凝固后硬度/透明度/颜色均会有一定的不同。劣质琼脂不光凝固性差,而且含有许多其它杂物。

    ㈡琼脂凝固性知识

    做为培养基的凝固剂,琼脂的凝固性不光与琼脂本身的质量相关,还受灭菌温度/灭菌时间/琼脂用量/pH值的影响。

    ①(0.7~0.8)%琼脂水溶液冷却后凝固良好。针对经常使用的微生物培养基,琼脂的用量趋向于基本稳定,通常条形琼脂的用量为2左右,粉状琼脂的用量为(1~1.5)%。

    ②培养基的pH值对琼脂的凝聚影响很大,在正常浓度范围内是琼脂能不能凝聚的主要因素。

    ③在4.302和120℃时影响不大。廷长高温高压灭菌时间或反复高温高压处理不会影响其凝固性。当pH为5.0-8.0较高时,琼脂浓度是影响混凝度的具体原因。

    ④当制备的固体培养基的pH值小于3.44时,其凝固将决定于灭菌温度/温度/灭菌时间/琼脂量和pH值。当中,灭菌温度和时间与琼脂凝固性呈负相关,琼脂用量和pH值与琼脂凝固性呈正相关。但在这些原因中,琼脂的用量影响不大,因此在此类培养基的灭菌流程中,应掌握好灭菌温度、灭菌时间和pH值。选用较低的灭菌温度、较短的灭菌时间和适当提升培养基的pH值可以明显提升琼脂的凝固性。当pH值小于或等于4.0较低时,pH值是影响固化等级的关键原因。


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