无血清支原体(辅助液|液体|固体)培养基使用说明书附培养基检验
日期:2022-03-29 | 中海生物技术文库 | 浏览:1039 次
无血清支原体(辅助液|液体|固体)培养基使用说明书
【产品名称】
中文名称:无血清支原体培养基(https://www.zhzbio.com/product/jypyj-wxqzyt.html)
英文名称:Sera Free Mycoplasma Medium
汉语拼音:Wuxueqing Zhiyuanti Peiyangji
【性状】 液体培养基为澄清,无杂质,呈玫瑰红色液体;固体培养基为淡黄色固体,加热融化后无絮状物或沉淀;固体培养基辅助液恢复至室温后为橙色液体。
【作用与用途】 用于血清中支原体的检验。
【用法与判定】
1. 液体培养基 先放在室温半小时,然后置于常温水中轻轻摇动融化,待全部融化后分装后使用。分装量为:小瓶 20ml/瓶,小管 1.8ml/支。
2. 固体培养基 先将固体培养基和辅助液放在室温半小时。将固体培养基塑料盖拧松一点,微波炉或水浴融化。微波炉融化时使用中火,每次1分钟,待全部融化后使用。辅助液置于常温水中轻轻摇动融化,待全部融化后使用。当固体培养基温度降到 50℃左右时,,辅助液 37℃预热后缓慢贴壁加入,混合均匀后按平皿规格加入适量培养基(例如直径 60mm 的平皿加入固体培养基 9ml)制成固体平板。
3. 检验 取2ml 样品加入到小瓶中,0.2ml 样品加入到小管中,从小瓶中取液体,分别移植到2支小管液体培养基(0.2ml/支)、2 付固体培养基(0.1~0.2ml/付),将小瓶与小管放37℃培养,固体培养基放置 37℃、5%CO2 培养箱中培养。接种后第5日、第10日、第15日从小瓶中取培养物移植2支小管液体培养基(0.2ml/支)和2付固体平板(0.1~0.2ml/付)。每日观察培养物颜色有无变黄或变紫红的现象,若无变化,在最后 1 次移植培养 14 日后停止观察。在观察期内,如小瓶或任何1支小管培养物颜色出现明显变化(pH 变化达±0.5)时,应立即移植于2支小管液体培养基和2付固体平板进行培养,观察液体培养基是否出现恒定的pH变化以及固体培养基有无支原体菌落生长。每次检验时,均应同时设立阴、阳性对照。阳性对照为接种1~10CFU/0.2ml 质控菌液(猪鼻支原体BTS-7株)的小管液体培养基,和接种1~50CFU/0.2ml 质控菌液的固体平板培养基;阴性对照为接种灭菌生理盐水的小管液体培养基和固体平板培养基,同上法培养和观察。
4. 结果判定
4.1 检测结果有效性 当阳性对照液体培养基出现颜色变黄,固体平板上出现支原体菌落;阴性对照液体培养基不变色,固体平板上无支原体菌落时,检验有效,并作如下判定。
4.2 判定 若接种样品的小瓶或小管培养基出现颜色变黄,且固体平板上可见支原体菌落,则判该样品有支原体污染。
【注意事项】
1. 中海无血清支原体培养基自低温环境取出,恢复到室温后使用。液体培养基和辅助液常温融化;固体培养基可微波炉或水浴加热融化。
2. 制备固体平板时,固体培养基冷却至50℃左右,,辅助液37℃预热后缓慢贴壁加入,轻摇混匀,避免出现气泡。
3. 进行培养基灵敏度检验时的器皿,必须达到细胞培养的要求。
4. 如液体培养基出现浑浊或颜色变化,固体培养基平板表面干裂,应停止使用。
【规格】 无血清支原体液体培养基90ml/瓶;无血清支原体固体培养基60ml/瓶;无血清支原体固体培养基辅助液13ml/瓶。
【贮藏与有效期】 无血清支原体液体培养基-20℃以下保存,有效期为12个月;无血清支原体固体培养基 2~8℃保存,有效期为12个月;无血清支原体固体培养基辅助液-20℃以下保存,有效期为12个月。
【生产企业】 北京中海生物科技有限公司
中海生物技术(枣庄)有限公司
网址:www.zhzbio.com
仅供兽医诊断使用
附:培养基检验
1. 质控菌株 检验用质控菌株为猪鼻支原体BTS-7株。将冻干种子恢复原量以 10%的量接种无血清支原体液体培养基(使用前加入10%血清),经 35~37℃培养至变色,作为第1代;将第1代培养基物按 10%接种量接种无血清支原体液体培养基(使用前加入 10%血清),
35~37℃培养12~72h,取活菌滴度≥108CCU/ml 培养物作为工作种子。在使用过程中冻干种子传代次数不超过5代,工作种子在-20℃以下保存有效期为20日。
2. 检验方法
2.1 灵敏度试验
(1)培养 取工作种子液用待检液体培养基进行10倍系列稀释至10-10,另设1支未接种液体培养基作为对照,置35~37℃培养5~7日;取10-6稀释度菌液0.2ml 接种于固体培养基平板1个,另设1个未接种固体培养基平板作为对照,置37℃、5%CO2培养箱中培养 5~7日。同时各做2组重复。
(2)结果判定 以培养基呈现生长变色的最高稀释度作为其灵敏度。如果2组培养基灵敏度均≥10-8,对照不变色;固体培养基均有支原体菌落生长,对照无支原体菌落生长,判培养基合格。若仅1组液体培养基灵敏度≥10-8,或1组固体培养基有支原体菌落生长,取2倍待检品重检。重检后,如液体培养基灵敏度均≥10-8,固体培养基均有支原体菌落生长,判为合格。否则,判为不合格。
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